Consenso Experto sobre la Vitrificación de Oocitos y Embriones Humanos

La criopreservación de oocitos y embriones humanos es un componente crítico de las tecnologías de reproducción asistida (TRA). La vitrificación, una técnica de congelación rápida, se ha convertido en el método preferido debido a su capacidad para preservar la integridad estructural y funcional de estas células. Este documento de consenso busca proporcionar pautas integrales y sistemáticas para el proceso de vitrificación, garantizando servicios de alta calidad en centros reproductivos. Las recomendaciones se basan en la evidencia científica más reciente, prácticas clínicas y opiniones expertas, abarcando aspectos como la capacitación del personal, selección de reactivos, procedimientos técnicos, gestión de calidad y límites de almacenamiento.

Sección 1: Capacitación y calificación del personal

El éxito de la vitrificación depende en gran medida de la experiencia de los embriólogos que realizan el procedimiento. Por ello, la formación de nuevo personal es un paso crítico. Los principiantes son entrenados por embriólogos altamente experimentados, quienes evalúan su competencia mediante indicadores de gestión de calidad y su comprensión de los principios fundamentales de la vitrificación, como el control de la concentración de crioprotectores, la temperatura de operación y las tasas de calentamiento/enfriamiento.

El entrenamiento consta de varias etapas: primero, los aprendices practican con embriones de ratón en estadio de ocho células, menos sensibles a la vitrificación y descongelación. El estándar exige que la tasa de supervivencia de estos embriones no sea inferior a la de embriones humanos en estadio de división (Día 3) en el mismo centro. Tras la descongelación, los embriones de ratón se cultivan durante 24–48 horas, y la tasa de formación de blastocistos debe ser ≥80%.

Posteriormente, los aprendices trabajan con oocitos o embriones humanos descartados para familiarizarse con su tamaño, forma y manipulación durante la vitrificación y descongelación. Finalmente, bajo supervisión, se les permite procesar una pequeña proporción (inicialmente 20%) de muestras de pacientes. Este enfoque gradual asegura que adquieran confianza antes de manejar muestras valiosas.

Sección 2: Selección y uso de reactivos y consumibles

La elección de reactivos y consumibles es crucial. Se recomienda el uso de kits comerciales de vitrificación y descongelación con registros sanitarios válidos, sometidos a controles de calidad como pruebas con embriones de ratón, tests de endotoxinas bacterianas, esterilidad, pH y osmolaridad. Los laboratorios deben mantener dos marcas diferentes de reactivos para abordar emergencias, como lotes defectuosos o falta de suministros.

Los portadores de criopreservación se clasifican en abiertos o cerrados, según si la muestra contacta directamente con el nitrógeno líquido. Se prefieren sistemas cerrados o termos separados para gametos o embriones de pacientes con infecciones, minimizando el riesgo de contaminación cruzada.

Sección 3: Procesos de vitrificación y descongelación para oocitos, embriones en división y blastocistos

Vitrificación de oocitos

Los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente (24°C–26°C). Los oocitos se vitrifican 38–40 horas post-inyección de gonadotropina coriónica humana, desnudándose justo antes de la criopreservación. Oocitos inmaduros pueden madurar in vitro durante 24–48 horas previas. No se recomienda vitrificar oocitos gigantes o con discos de retículo endoplásmico liso. Cada portador debe contener ≤5 oocitos.

Pasos:

1. Preparar gotas de Solución Básica (SB) y Solución de Equilibrio (SE). Transferir los oocitos a SB por 3 minutos.
2. Conectar las gotas y mover los oocitos al centro por 3 minutos.
3. Transferir a SE cubierta con aceite (≥3 mL) por 6–9 minutos.
4. Lavar en al menos 3–5 posiciones de Solución de Vitrificación (SV).
5. Cargar en el portador según instrucciones (≤45–60 segundos).

Vitrificación de embriones en división y blastocistos

Procedimiento similar, realizado a 24°C–26°C o 37°C. Cada portador debe contener ≤2 embriones en división o 1 blastocisto de alta calidad. Embriones elegibles incluyen aquellos en Día 2–3 y blastocistos en Día 5–7.

Descongelación

1. Preparar Solución de Descongelación (SD) a 37°C y Solución de Dilución (SL) a temperatura ambiente.
2. Sumergir el portador en SD (≤1 segundo), dejando las muestras 45–60 segundos.
3. Transferir a SL por 3 minutos y luego a SB por 5 minutos (dos lavados).

El momento de las operaciones pos-descongelación es crítico:

• Inyección intracitoplasmática: 2–3 horas post-descongelación.
• Transferencia de blastocistos: 2 horas post-descongelación para evaluar reexpansión.

Sección 4: Contracción artificial de blastocistos

Técnica para mejorar resultados. Se utiliza láser en la unión celular del trofoectodermo, lejos de la masa celular interna. Aplicar 1–2 pulsos y vitrificar a los 10–15 minutos para evitar reexpansión.

Sección 5: Asistencia a la eclosión

Se recomienda adelgazamiento láser de la zona pelúcida (ZP) en embriones en división o mórulas (reducción del 50%–80% de espesor en 25%–50% de la circunferencia). En blastocistos grados 4–6, crear una apertura del 25%–50% de la ZP.

Sección 6: Gestión de calidad

Supervivencia exitosa

• Oocito: Membrana intacta y citoplasma claro.
• Embrión en división: ≥50% de blastómeros intactos.
• Blastocisto: ≥75% células intactas o reexpansión del blastocele en 2 horas.

Indicadores clave de rendimiento

Monitorear tasas de supervivencia, formación de blastocistos y otros parámetros. Los valores de competencia representan mínimos aceptables, y los valores de referencia son objetivos aspirantes. Investigar anomalías como tasas inferiores a niveles de competencia o dos desviaciones estándar bajo el promedio anual previo.

Sección 7: Límite temporal de criopreservación

El tiempo óptimo de almacenamiento es:

• Oocitos vitrificados: ≤1 año.
• Embriones: ≤5 años.

Consideraciones éticas y uso eficiente de recursos determinan estos límites.

Conclusión

Este consenso ofrece pautas integrales para la vitrificación de oocitos y embriones humanos, desde capacitación hasta gestión de calidad. Su implementación mejorará los resultados en TRA y beneficiará a los pacientes.

doi.org/10.1097/CM9.0000000000002895