Una sola copia del supresor tumoral grande 1 o del supresor tumoral grande 2 es suficiente para la hematopoyesis normal
Las células madre hematopoyéticas (HSC) poseen una capacidad notable para autorrenovarse y diferenciarse en todos los subtipos de células sanguíneas, desempeñando un papel crucial en el mantenimiento de la homeostasis hematopoyética. El estado quiescente de las HSC es esencial para su función a largo plazo y la preservación de su capacidad de autorrenovación. Comprender los mecanismos moleculares que regulan la quiescencia de las HSC es fundamental para entender procesos como la regeneración tisular y las respuestas al estrés. La vía de señalización de Hippo, un regulador clave del tamaño de órganos y la función de células madre, ha sido ampliamente estudiada en diversos tejidos. Sin embargo, su papel en el sistema hematopoyético sigue siendo poco claro. Los supresores tumorales grandes 1 (LATS1) y 2 (LATS2), componentes críticos de la vía de Hippo, actúan como reguladores de células madre y supresores tumorales. Este estudio investiga el rol de LATS1 y LATS2 en la hematopoyesis normal mediante modelos de ratones knockout.
Expresión de LATS1 y LATS2 en células hematopoyéticas
Los niveles de expresión de LATS1 y LATS2 se examinaron en subpoblaciones de células hematopoyéticas primitivas y maduras de ratón. Los análisis mediante PCR cuantitativa con transcriptasa inversa (qRT-PCR) revelaron que ambos genes se expresan ampliamente en células hematopoyéticas, con niveles más elevados en células primitivas comparadas con células maduras. Específicamente, LATS1 y LATS2 mostraron mayor expresión en células progenitoras hematopoyéticas (HPC) que en HSC de largo plazo (LT-HSC), progenitores multipotentes linfo-primados (LMPP), progenitores mieloides comunes (CMP), progenitores granulocito-monocíticos (GMP) y progenitores megacariocítico-eritroides (MEP). Destacó que LATS1 presentó niveles de expresión superiores a LATS2, sugiriendo un rol más relevante de LATS1 en la hematopoyesis.
Generación de ratones knockout para LATS1 y LATS2
Mediante el sistema CRISPR/Cas9, se diseñaron ARN guía (sgRNA) dirigidos al exón 4 de LATS1 y al exón 2 de LATS2. Se obtuvieron dos líneas knockout independientes para cada gen, confirmándose mutaciones de cambio de marco mediante secuenciación. Los homocigotos no fueron viables, indicando letalidad embrionaria. Los heterocigotos, en cambio, mostraron fertilidad y fenotipo normal. Los niveles de expresión de LATS1 y LATS2 en médula ósea se redujeron a la mitad en heterocigotos, validando los modelos.
Hematopoyesis normal en heterocigotos de LATS1 y LATS2
En ratones de 8 a 12 semanas, los conteos sanguíneos completos no mostraron diferencias en leucocitos, neutrófilos, linfocitos, monocitos, plaquetas, eritrocitos o hemoglobina entre heterocigotos y controles. Tampoco se observaron diferencias en el número total de células de médula ósea ni en la frecuencia de HPC o HSC (LT-HSC y CD34-LSK) mediante citometría de flujo. Estos hallazgos indican que un solo alelo funcional de LATS1 o LATS2 basta para mantener una hematopoyesis normal.
Efecto de la depleción de LATS1 y LATS2 en la supervivencia
Al tratar heterocigotos y controles con 5-fluorouracilo (5-FU), agente que elimina células proliferativas y estimula la reconstitucion hematopoyética, no se detectaron diferencias en la supervivencia global tras tres semanas de monitoreo. Ambos grupos murieron progresivamente tras la segunda y tercera inyección, sugiriendo que la depleción de LATS1 o LATS2 no afecta la autorrenovación de las HSC a largo plazo.
Discusión
La vía de Hippo regula la actividad de los coactivadores transcripcionales YAP y TAZ. Este estudio demuestra que la inhibición de esta vía mediante la depleción de LATS1/LATS2 no altera la hematopoyesis ni la función de HSC, pese a su letalidad embrionaria en homocigotos. La normalidad observada en heterocigotos sugiere que LATS1 y LATS2 no son genes haploinsuficientes en este contexto.
A diferencia de tejidos sólidos, donde la inhibición por contacto regula la proliferación, las células hematopoyéticas residen en un ambiente líquido donde este mecanismo podría ser irrelevante. Esto explicaría la ausencia de fenotipo proliferativo anormal tras la depleción de LATS1/LATS2. Curiosamente, la pérdida de NF2 (regulador upstream de Hippo) en células hematopoyéticas tampoco afecta su función, aunque sí altera nichos de médula ósea.
En conclusión, una sola copia de LATS1 o LATS2 es suficiente para la hematopoyesis normal. Futuros estudios deberán evaluar sus niveles proteicos, actividad cinasa bajo estrés hematopoyético (ej. trasplantes seriados) y su papel específico en microambientes medulares.
DOI: 10.1097/CM9.0000000000000934