Regulación al alza de miR-345-5p suprime el crecimiento celular en adenocarcinoma pulmonar mediante la modulación de la proteína RhoA y la vía Rho/ROCK
El cáncer de pulmón sigue siendo uno de los cánceres más prevalentes y letales a nivel mundial, con el adenocarcinoma pulmonar como un subtipo histológico importante del carcinoma de pulmón de células no pequeñas (CPCNP). A pesar de los avances en diagnóstico y tratamiento, la tasa de supervivencia a 5 años para este subtipo es de solo el 15%, lo que destaca la necesidad urgente de investigación sobre sus mecanismos moleculares para mejorar las estrategias terapéuticas. Los microARNs (miARNs), pequeños ARN no codificantes que regulan la expresión génica, han surgido como elementos críticos en la progresión del cáncer. Entre ellos, miR-345-5p se ha implicado en varios tipos de cáncer, pero su papel en el adenocarcinoma pulmonar sigue siendo poco comprendido. Este estudio investiga la función biológica y los mecanismos moleculares de miR-345-5p en adenocarcinoma pulmonar, centrándose en su interacción con RhoA y la vía de señalización Rho/ROCK.
El estudio comenzó analizando los niveles de expresión de miR-345-5p en tejidos y líneas celulares de adenocarcinoma pulmonar. Mediante RT-qPCR, se observó que la expresión de miR-345-5p era significativamente menor en tejidos tumorales comparados con tejidos normales adyacentes (0,241 ± 0,095 vs. 1,000 ± 0,233; t = 19,247; P < 0,001). Resultados similares se obtuvieron en líneas celulares (A549, H1650, PC-9 y H441) frente a células epiteliales bronquiales normales (BEAS-2B), sugiriendo un papel supresor de tumores para miR-345-5p.
Experimentos funcionales demostraron que la sobreexpresión de miR-345-5p en células PC-9 y H1650 inhibió la proliferación celular. Los ensayos de formación de colonias y de incorporación de EdU mostraron reducciones significativas: en PC-9, las colonias disminuyeron de 103,446 ± 12,132 a 47,684 ± 6,892 (t = 5,666; P = 0,005), y las células EdU-positivas de 54,173 ± 5,479% a 23,174 ± 3,166% (t = 9,769; P < 0,001). También se observó inducción de apoptosis: en PC-9, la apoptosis aumentó de 2,550 ± 0,421% a 14,931 ± 2,653% (t = 12,287; P < 0,001), y en H1650, de 3,112 ± 0,655% a 16,507 ± 3,052% (t = 10,409; P < 0,001).
Además, la migración e invasión celular se redujeron drásticamente. En ensayos de cicatrización, el cierre de la herida en PC-9 disminuyó de 54,511 ± 6,859% a 21,272 ± 3,559% (t = 6,823; P = 0,002), y en H1650, de 67,508 ± 6,532% a 32,831 ± 4,557% (t = 6,567; P = 0,003). Los ensayos de invasión Transwell mostraron reducciones similares.
Mediante herramientas bioinformáticas y ensayos de luciferasa, se identificó a RhoA como diana directa de miR-345-5p. La actividad de luciferasa en vectores wild-type (WT) de RhoA se redujo significativamente en células PC-9 (0,492 ± 0,051 vs. 1,000 ± 0,136; t = 33,469; P < 0,001) y H1650 (0,411 ± 0,047 vs. 1,000 ± 0,164; t = 16,000; P < 0,001). La sobreexpresión de miR-345-5p redujo los niveles de ARNm y proteína de RhoA, mientras que la sobreexpresión de RhoA revirtió los efectos inhibitorios en proliferación, migración e invasión.
Análisis de Western blot confirmaron que miR-345-5p regula negativamente componentes de la vía Rho/ROCK, incluyendo ROCK1 y ROCK2. El inhibidor de RhoA, CCG-1423, corroboró la participación de esta vía en la supresión del crecimiento tumoral mediada por miR-345-5p.
En conclusión, este estudio revela que miR-345-5p actúa como supresor tumoral en adenocarcinoma pulmonar al regular RhoA y la vía Rho/ROCK, inhibiendo proliferación, migración e invasión, e induciendo apoptosis. Estos hallazgos sugieren que miR-345-5p podría ser un blanco terapéutico prometedor para esta enfermedad.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000001804