Patrones de Metilación del ADN a Nivel Genómico en Monocitos Derivados de Pacientes con Síndrome de Sjögren Primario

El síndrome de Sjögren primario (pSS) es un trastorno autoinmune crónico caracterizado por la infiltración linfocítica de las glándulas exocrinas, lo que conduce a sequedad mucosa y manifestaciones sistémicas que afectan órganos como los riñones, el hígado y los pulmones. Evidencia emergente destaca el papel de la desregulación epigenética, particularmente la metilación del ADN, en la patogénesis del pSS. Este estudio investiga los patrones de metilación del ADN a nivel genómico en monocitos de sangre periférica de pacientes con pSS, con el objetivo de elucidar las contribuciones epigenéticas a los mecanismos de la enfermedad.

Características de los Pacientes y Diseño del Estudio

El estudio incluyó a 11 pacientes con pSS no tratados (10 mujeres, 1 hombre; edad media de 45,3 ± 13,7 años) y 5 controles sanos (HCs) emparejados por edad y sexo. Todos los pacientes cumplieron con los criterios de clasificación de 2016 del Colegio Americano de Reumatología/ Liga Europea contra el Reumatismo para pSS. Las características clínicas incluyeron sequedad oral (11/11), sequedad ocular (8/11), dolor articular (6/11), inflamación de las glándulas parótidas (3/11) y enfermedad pulmonar intersticial (4/11). El perfil serológico reveló niveles elevados de IgG (mediana 23,05 g/L), positividad para anti-SSA (11/11), positividad para anti-SSB (9/11) y una puntuación media del Índice de Actividad de la Enfermedad de Sjögren de EULAR (ESSDAI) de 2,64 ± 1,15. Los monocitos se aislaron de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) utilizando microesferas magnéticas CD14, logrando una pureza >95%. El perfil de metilación a nivel genómico se realizó utilizando el Illumina Infinium Human Methylation 850K BeadChip.

Perfiles de Metilación Diferencial en Monocitos de pSS

El análisis comparativo identificó 2,819 posiciones diferencialmente metiladas (DMPs) entre pacientes con pSS y HCs, con predominio de hipometilación (1,977 DMPs hipometiladas vs. 842 DMPs hipermetiladas). Estas DMPs correspondieron a 1,313 genes únicos, incluyendo 460 ubicados en regiones promotoras de genes (299 hipometilados, 129 hipermetilados, 32 mixtos). Los genes hipometilados se enriquecieron en vías relacionadas con el interferón (IFN), como IFI44L, MX1, PARP9 y IFITM1, que son críticos para la señalización del IFN tipo I. Notablemente, IFI44L exhibió la hipometilación más pronunciada, con una diferencia de valor β >0,6, sugiriendo una fuerte desregulación de las vías de IFN en los monocitos de pSS.

Enriquecimiento Funcional de Genes Metilados

El análisis de ontología génica (GO) reveló que los genes hipometilados se asociaron con la unión de antígenos, la regulación transcripcional (por ejemplo, actividad de la ARN polimerasa II) y la adhesión celular. Los procesos biológicos incluyeron señalización de IFN-γ, presentación de antígenos y vías metabólicas. El análisis de rutas de KEGG destacó el enriquecimiento en infección por el virus de Epstein-Barr, infección por el virus linfotrópico humano tipo 1, enfermedad tiroidea autoinmune y rechazo de aloinjertos. También se implicaron vías metabólicas, como la diabetes tipo 1 y la señalización de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK). Estos hallazgos subrayan la interacción entre la desregulación inmune, la mímica viral y las alteraciones metabólicas en el pSS.

Superposición con Células Epiteliales de Glándulas Salivales

El análisis comparativo con datos disponibles públicamente de células epiteliales de glándulas salivales (SGECs) de pacientes con pSS reveló 20 DMPs superpuestas correspondientes a 12 genes (PTPRN2, TNK1, WDR8, TSPAN9, VIPR2, OBSCN, KCNT1, ZNF703, NEURL3, LMX1B, LOC146336, FTSJD2). Las vías compartidas incluyeron la regulación del ciclo celular, la senescencia celular y la señalización de interleucina-17 (IL-17). Esta superposición sugiere mecanismos epigenéticos convergentes en células inmunes y tejidos diana, potencialmente impulsando la disfunción glandular y la inflamación sistémica.

Correlaciones Clínicas y Asociaciones Serológicas

Los análisis de subgrupos exploraron asociaciones entre los patrones de metilación y las características clínicas. Los pacientes con niveles séricos elevados de IgG (≥18 g/L) mostraron enriquecimiento en las vías de señalización Notch, metabolismo del piruvato y metabolismo de la tirosina, vinculando la reprogramación metabólica con la hiperactividad de las células B. Los pacientes doble positivos para anti-SSA/SSB (DP) mostraron 1,230 DMPs (984 genes), en comparación con solo 54 DMPs (27 genes) en los pacientes positivos solo para anti-SSA (SP). Las DMPs específicas de DP se enriquecieron en la señalización Ras, la biogénesis de ribosomas y las vías de AMPK, mientras que los pacientes SP mostraron un enriquecimiento limitado en la señalización Notch. Estos hallazgos sugieren que el estado de autoanticuerpos influye en los paisajes epigenéticos, con los pacientes DP exhibiendo una desregulación más amplia de las vías.

Perspectivas Mecanicistas e Implicaciones Patogénicas

El predominio de la hipometilación en los monocitos de pSS se alinea con estudios previos en células T CD4+, células B y SGECs, indicando un cambio epigenético sistémico hacia la activación inmune. La hipometilación de genes inducibles por IFN (IFI44L, MX1) puede perpetuar la activación de la firma de IFN, un sello distintivo del pSS. Las vías defectuosas de presentación de antígenos, evidenciadas por la hipometilación de genes HLA, podrían comprometer la tolerancia inmune, fomentando la producción de autoanticuerpos. Las alteraciones en las vías metabólicas, particularmente en AMPK y el metabolismo del piruvato, pueden reflejar respuestas adaptativas al estrés inflamatorio, influyendo en la diferenciación de monocitos y la secreción de citoquinas.

La superposición entre los patrones de metilación de monocitos y SGECs resalta los impulsores epigenéticos compartidos de la patología glandular. Por ejemplo, el enriquecimiento en la vía de IL-17 puede promover la inflamación glandular, mientras que la desregulación del ciclo celular podría exacerbar el daño tisular. La señalización Notch, implicada tanto en pacientes con IgG elevada como en modelos autoinmunes, puede mejorar la diferenciación de macrófagos y la producción de citoquinas, contribuyendo a la inflamación crónica.

Limitaciones y Direcciones Futuras

Aunque este estudio proporciona perfiles de metilación completos, se necesita validación funcional de genes y vías candidatas. Estudios longitudinales podrían aclarar si los cambios de metilación preceden al inicio de la enfermedad o son resultado de la inflamación. Se requieren cohortes más grandes para validar asociaciones con subconjuntos clínicos (por ejemplo, positividad para anti-SSB, enfermedad pulmonar intersticial). Estudios mecanicistas que exploren la actividad de DNMT3A y TET2 en monocitos de pSS pueden revelar objetivos terapéuticos para modular la desregulación epigenética.

Conclusión

Este análisis a nivel genómico identifica alteraciones significativas en la metilación del ADN en monocitos de pSS, enfatizando la hipometilación de genes relacionados con IFN y de regulación inmune. La convergencia de cambios epigenéticos en monocitos y SGECs subraya su papel sinérgico en la patogénesis de la enfermedad. Estos hallazgos mejoran la comprensión de los mecanismos del pSS y destacan posibles biomarcadores para el diagnóstico y la terapia dirigida.

doi.org/10.1097/CM9.0000000000001451