Ensayo inmunocromatográfico rápido de oro coloidal para el diagnóstico de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19)
El brote global de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), causada por el síndrome respiratorio agudo severo coronavirus-2 (SARS-CoV-2), ha generado neumonía generalizada y síndrome respiratorio agudo grave. Aunque China logró controlar la epidemia mediante medidas estrictas, el número de casos confirmados y muertes sigue aumentando en otros países. El SARS-CoV-2 es notablemente más contagioso que sus predecesores, el coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) y el coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV). La identificación rápida y precisa del virus es crucial para controlar su propagación. Actualmente, la tomografía computarizada y los parámetros hematológicos son marcadores iniciales de infección, mientras que la prueba de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) para detectar ácidos nucleicos virales es el estándar de oro en el diagnóstico clínico. Sin embargo, la RT-PCR consume tiempo, requiere laboratorios especializados y técnicos capacitados, y es susceptible a variaciones en la calidad de las muestras. En contraste, la detección de anticuerpos específicos en suero mediante el ensayo inmunocromatográfico de oro coloidal (GICA) ofrece una alternativa rápida, sensible y sin necesidad de equipos, ideal para pruebas en el punto de atención.
Este estudio desarrolló kits GICA para detectar anticuerpos inmunoglobulina (Ig) M e IgG específicos del SARS-CoV-2 en sangre de pacientes. Se diseñaron dos kits: el Kit A utiliza una línea única para capturar IgM e IgG dirigidas a la proteína N del virus, mientras que el Kit B incluye líneas separadas para distinguir entre ambos anticuerpos. Ambos emplean proteína N marcada con oro coloidal como antígeno. Para la línea de control, se seleccionaron IgG de conejo y anticuerpos anti-IgG de cabra como antígeno y anticuerpo, respectivamente.
La preparación de los kits implicó mezclar 10 mL de solución de oro coloidal (40 nm) con 65 mL de carbonato de potasio (0,1 mol/L), añadir rápidamente el antígeno recombinante de proteína N y incubar. Tras centrifugación y lavado, los materiales se ensamblaron en almohadillas de conjugación y láminas de nitrocelulosa. Para evaluar sensibilidad y especificidad, se analizaron muestras de suero de 43 pacientes con COVID-19 confirmado y 45 pacientes con otras enfermedades. Los resultados se interpretaron cualitativamente tras 15 minutos, considerando válidos solo aquellos con coloración en la línea de control.
Los resultados mostraron sensibilidades del 88,3% (Kit A) y 93,0% (Kit B), con especificidad del 100% en ambos. La mayor sensibilidad del Kit B se atribuye a las líneas de detección separadas, que capturan eficientemente IgM o IgG específicas. Los ensayos se validaron mediante western blot, utilizando anticuerpos monoclonales humanos contra la proteína N. Cabe destacar que el tamaño reducido de la muestra podría haber sobreestimado estos valores.
En resumen, este estudio desarrolló kits GICA rápidos y sensibles para detectar anticuerpos IgG e IgM contra el SARS-CoV-2. Estas herramientas representan una solución práctica para el diagnóstico clínico y la vigilancia epidemiológica durante la pandemia, facilitando el control temprano de la transmisión.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000000922