El microRNA-448 inhibe la proliferación, migración e invasión de la línea celular de glioma U251 mediante la regulación de B-cell Lymphoma-2
El glioma es uno de los tumores malignos más comunes del sistema nervioso central, caracterizado por su alta agresividad y una mediana de supervivencia inferior a dos años tras el diagnóstico. B-cell lymphoma-2 (BCL-2), un regulador clave en la señalización de la apoptosis, se considera un factor pronóstico adverso en el glioma. La sobreexpresión de BCL-2 inhibe la apoptosis celular, un fenómeno observado en múltiples tipos de cáncer. La red regulatoria de la apoptosis se ha estudiado ampliamente, y los inhibidores de BCL-2 han mostrado resultados prometedores en ensayos clínicos. Además, la identificación de mecanismos de señalización upstream que controlan la expresión y función de BCL-2 ofrece nuevas dianas terapéuticas. Los microRNAs (miRNAs), RNAs no codificantes de 18 a 25 nucleótidos, regulan la expresión génica al unirse a la región 3′-no traducida (UTR) de ARNm diana, lo que conduce a la represión traduccional o a la degradación del ARNm. Los miRNAs son considerados biomarcadores prometedores y herramientas terapéuticas potenciales.
En este estudio, se recolectaron tejidos de glioma y tejidos peritumoral de pacientes sometidos a resección de glioma en el Tercer Hospital Afiliado de la Universidad de Soochow entre 2010 y 2015. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética del hospital, y se obtuvo el consentimiento informado de los participantes. Mediante las bases de datos miRDB, TargetScan y miRNA, se predijeron miRNAs que regulan a BCL-2. Solo miR-448 y miR-204-5p fueron identificados como posibles reguladores de BCL-2 en las tres bases de datos. Aunque se ha reportado que miR-204-5p inhibe la progresión del glioma al dirigirse a BCL-2, el papel de miR-448 en este contexto permanecía poco claro. Estudios recientes indican que miR-448 regula negativamente al gen oncogénico CTTN, inhibiendo la proliferación celular y promoviendo la apoptosis en líneas celulares de glioma. Sin embargo, la expresión de miR-448 en tejidos de glioma y su posible interacción con BCL-2 requerían mayor investigación.
Los niveles de expresión de BCL-2 y miR-448 se midieron en 20 muestras de tejido de glioma, 20 de tejido peritumoral, dos líneas celulares de glioma (U251 y U373 MG Uppsala) y la línea celular de astrocitos humanos normales (HEB) mediante qRT-PCR. Los resultados mostraron que BCL-2 estaba sobreexpresado en tejidos y líneas celulares de glioma, mientras que miR-448 estaba regulado negativamente. Se observó una correlación inversa entre la expresión de miR-448 y BCL-2 en los tejidos de glioma, sugiriendo que la disminución de miR-448 contribuye a la sobreexpresión de BCL-2.
Para validar que miR-448 regula directamente a BCL-2, se clonó la región 3′-UTR de BCL-2, que contiene dos sitios de unión putativos para miR-448, así como mutaciones de estos sitios, en el vector psi-check2. Las secuencias codificantes de BCL-2 sin la 3′-UTR se clonaron en el vector pcDNA3.1. Estos constructos, junto con el mimético de miR-448 o un control negativo, se transfectaron en células Hela. La actividad de luciferasa se analizó mediante un sistema de reportero dual, normalizando la actividad relativa a la luciferasa de Renilla. Los resultados confirmaron que miR-448 se une directamente a la 3′-UTR de BCL-2 en células de glioma.
Experimentos adicionales incluyeron la transfección de la línea celular U251 con el mimético de miR-448, solo o combinado con pcDNA3.1-BCL-2, para evaluar proliferación, formación de colonias y capacidad de invasión. Los hallazgos mostraron que la expresión de miR-448 está reducida en tejidos y líneas celulares de glioma, correlacionándose inversamente con BCL-2. La transfección con el mimético de miR-448 disminuyó la expresión de BCL-2 en U251, suprimiendo la proliferación, formación de colonias e invasión. La sobreexpresión de BCL-2 revirtió los efectos inhibitorios de miR-448 en estos procesos.
Este estudio demuestra que miR-448 regula directamente a BCL-2 y está regulado negativamente en gliomas. miR-448 actúa como un miRNA supresor tumoral al inhibir la expresión de BCL-2, destacando su potencial como biomarcador y estrategia terapéutica en pacientes con glioma. Los resultados respaldan la importancia de miR-448 en la regulación de BCL-2 y su papel en la supresión de la progresión del glioma.
Los datos de qRT-PCR confirman la sobreexpresión de BCL-2 y la regulación negativa de miR-448 en gliomas. La correlación inversa entre ambos y el ensayo de luciferasa validan su interacción directa. Los ensayos funcionales en U251 refuerzan el efecto supresor de miR-448, reversible mediante la sobreexpresión de BCL-2. Estos hallazgos subrayan el eje regulatorio miR-448/BCL-2 en la patogénesis del glioma.
En conclusión, miR-448 es un regulador crítico de BCL-2 en el glioma, cuya disminución favorece el fenotipo maligno. Esto posiciona a miR-448 como un biomarcador relevante y una diana terapéutica prometedora, abriendo nuevas vías para terapias basadas en miRNAs. Futuros estudios deberán explorar aplicaciones clínicas de miR-448 y su sinergia con terapias existentes.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000000572