Aplicación de la tecnología de secuenciación de ARN para explorar el mecanismo de reparación del Tuina en el músculo gastrocnemio de ratas con lesión del nervio ciático
La lesión del nervio periférico (PNI) se refiere al daño en el plexo nervioso periférico, tronco nervioso o sus ramas causado por fuerzas externas. Las células derivadas del músculo esquelético desempeñan un papel relevante en la reparación nerviosa debido a su fuerte función secretora y capacidad para diferenciarse en células similares a las de Schwann u otros tipos celulares, promoviendo la regeneración del nervio periférico. El Tuina, una terapia manual tradicional china, ha demostrado aliviar síntomas como espasmos musculares y dolor causados por daño nervioso. Este estudio tuvo como objetivo explorar los efectos del Tuina en la recuperación de la lesión del nervio ciático (SNI) en ratas, centrándose en cambios en la fuerza muscular de las extremidades posteriores y alteraciones genéticas en el músculo gastrocnemio mediante secuenciación de ARN.
Diseño y metodología experimental
El estudio incluyó 27 ratas Sprague-Dawley (SD) macho de 6 semanas, con peso de 200 ± 10 g. Las ratas se dividieron aleatoriamente en tres grupos: grupo Sham, grupo SNI y grupo Tuina. Antes de la cirugía, se sometieron a ayuno y privación de agua durante 24 horas, seguido de anestesia con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico al 1% (0,35 mL/100 g). Las ratas se fijaron en posición prona, y se preparó la unión cadera-fémur derecha con yodóforo, rasurado y reesterilización. Se realizó una incisión de 1 cm siguiendo la dirección del nervio ciático, exponiendo el borde inferior del músculo piriforme. El nervio ciático se identificó, esterilizó y suturó en el grupo Sham. En los grupos SNI y Tuina, el nervio se comprimió con pinzas hemostáticas 5 mm distal al nódulo durante 5 segundos con fuerza completa (6 N), creando un punto de lesión de 2 mm. El área se irrigó con solución salina y la herida se suturó.
Postcirugía, las extremidades posteriores del grupo Sham recuperaron movilidad en un día. En contraste, los grupos SNI y Tuina mostraron articulaciones de rodilla rectas con flexión limitada y cojera, confirmando el modelado exitoso de SNI. Las ratas de los grupos Sham y SNI recibieron alimentación rutinaria, mientras que el grupo Tuina inició tratamiento al día 7 postcirugía. Las técnicas de Tuina, incluyendo presión puntual, pellizco y amasamiento, se aplicaron en los puntos Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) y Yanglingquan (GB34) del lado afectado una vez al día durante 9 minutos. El tratamiento se administró durante 10 días consecutivos, seguido de 1 día de descanso, repitiéndose por otros 10 días, totalizando 20 intervenciones. Para reducir el estrés, las ratas fueron acariciadas durante 9 minutos antes de cada intervención.
Evaluación conductual y de fuerza muscular
Se utilizó un plano inclinado eléctrico para medir cambios en la fuerza muscular de las extremidades posteriores. Las pruebas se realizaron antes de la cirugía y en los días 0, 5, 10, 15 y 20 de la intervención. La cabeza de las ratas se colocó sobre el tablero, incrementando gradualmente el ángulo hasta que no pudieron mantener su posición durante 5 segundos. Se registró el ángulo crítico, tomando el promedio de tres mediciones.
Secuenciación de ARN y análisis de datos
Tras la intervención, se recolectó tejido del gastrocnemio derecho de nueve ratas por grupo bajo anestesia. El ARN total se extrajo de tejido de tres ratas, mezclándose como una muestra, con tres réplicas biológicas por grupo. La secuenciación de ARN se realizó, y los datos se analizaron con SPSS 22.0 mediante ANOVA unidireccional.
Resultados
Las pruebas de plano inclinado mostraron disminución significativa del ángulo en los grupos SNI y Tuina versus Sham antes de la intervención. Al día 10, el grupo Tuina mostró aumento significativo del ángulo comparado con SNI (P < 0,05), incrementándose más en los días 15 y 20 (P < 0,01). Sin embargo, persistieron diferencias significativas entre Tuina y Sham.
La secuenciación identificó 44 genes diferencialmente expresados (DEGs) entre Sham y Tuina. Cuatro genes en Sham y 20 en Tuina mostraron diferencias significativas frente a SNI. El análisis GO reveló participación en procesos celulares, metabólicos, respuesta a estímulos, y vías como señalización Wnt. El análisis KEGG destacó rutas de metabolismo de aminoácidos, sistema inmune, y vías AMPK. Los DEGs incluyeron Ankrd1 (regulador de conversión de fibras musculares), Eda2r (regulador de reparación nerviosa) e IL12rb2 (relacionado con reparación de PNI).
Discusión
Los resultados sugieren que el Tuina promueve la recuperación de SNI mediante la regulación de Ankrd1, que estabiliza la morfología del gastrocnemio, y modula IL12rb2 y Eda2r, involucrados en vías de señalización pro-reparación. La interacción citocina-receptor y la vía AMPK podrían mediar estos efectos.
Conclusión
El Tuina mejoró la fuerza muscular en ratas con SNI, posiblemente mediante la modulación de la expresión génica en el gastrocnemio. Los DEGs identificados involucran múltiples funciones biológicas, sugiriendo que el mecanismo de reparación del Tuina podría relacionarse con procesos celulares, respuesta a estímulos y vías de señalización específicas.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000001960